Studien zur spezifischen Detektion von Epitopen des MUC5AC-Proteins und ihrer perspektivischen Eignung als blutbasierter Tumoranzeiger mittels monozytärer Modellzellen

Das duktale Adenokarzinom des Pankreas hat in Deutschland weiterhin eine schlechte Prognose, was häufig auf einen zu späten Diagnosezeitpunkt zurückzuführen ist. Im Zusammenhang mit Tumorfrüherkennung wurde das Verfahren der epitop detection in monocytes (EDIM) etabliert, welches von peripheren Blutmonozyten phagozytiertes Material mittels zytometrischer Analysen nachweist und dabei sensitiver als direkte Messungen aus Vollblutproben ist. Darauf aufbauend wurde ein Tumormarkertest entwickelt, welcher eine frühe Karzinogenese mit hoher Testgüte nachweist, jedoch keine Aussage über die Tumorlokalisation zu treffen kann. MUC5AC stellt dabei einen Tumormarker des Pankreaskarzinoms dar, welcher ein möglicher Kandidat ist, dass EDIM-Assay um einen entitätsspezifischen Marker zu erweitern. Ziel dieser Arbeit ist es, den Proteinmarker MUC5AC in einem monozytären Zellmodell, dem THP-1-Zellmodell, zu exprimieren und dann anschließend mit Hilfe des spezifischen Antikörpers 45M1 zytometrisch zu analysieren. Dazu wurden unterschiedlich große und teilweise überlappende Fragmente des MUC5AC-Proteins rekombinant hergestellt und nachfolgend auf Detektierbarkeit durch 45M1 untersucht. In Westernblotstudien und durch zytometrische Analysen intrazellulärer Expression konnten drei der vier erzeugten Fragmente spezifisch detektiert werden. Darauf aufbauend wurden Experimente durchgeführt, die von 45M1 gebundenen Fragmente in der Zelllinie THP-1 zu exprimieren. Trotz umfangreicher Optimierungsversuche konnte keine intrazelluläre Proteinexpression beobachtet werden. In einem alternativen Ansatz wurde versucht, mittels Phagozytose ein MUC5AC-Fragment intrazellulär in THP-1-Zellen anzureichern. Dabei konnte eine Zunahme der Fluoreszenzintensität verzeichnet werden, was eine Phagozytose der Proteinfragmente vermuten lässt. Jedoch benötigt das Phagozytoseassay weitere Optimierungsschritte. Als Ausblick wäre zusätzlich eine Überprüfung der Ergebnisse mittels Patient:innenproben angedacht.